[器材和試劑]
● PCR試劑和設(shè)備
● Winard PCR純化試劑盒（Promega）
● 定制的DNA引物
● VL—NotI引物 （5，—GAG TCA TTC TCG ACT TGC GGC CGC ACC TAG CAC GGT CAG CTT GGT CCC TCC GCC GAA CAC CCA ACC—3’）
● LMB3引物
● 用于scFv基因文庫(kù)限制性消化的試劑和設(shè)備
● 已擴(kuò)增的scFv基因文庫(kù)DNA

[方法]
1．配制4個(gè)50ul PCR反應(yīng)混合液， 包含：
● 去離子水，35．5ul
● 20×dNTP（每種5mmol/L），2．5ul
● 10×Vent聚合酶緩沖液，5．0ul
● LMB3引物 （10pmol/ul）， 2．5ul
● VL—NotI引物 （10pmol/ul）， 2．5ul
● scFV基因模板DNA（100ng）， 1ul
● VentDNA聚合酶（2單位），1．0ul
2．在有加熱蓋的熱循環(huán)儀內(nèi)，加熱反應(yīng)混合液到94℃5分鐘。
3．以94℃1分鐘、42℃1分鐘、72℃2分鐘的條件共循環(huán)30次，擴(kuò)增VL基因。
4．用Winard PCR純化試劑盒純化PCR產(chǎn)物。
5．用NcoI和NotI消化PCR產(chǎn)物。

ia8m.com